【NGS介紹系列- Pacbio Sequencing by binding (SBB) technology介紹】

發佈於 2025-2-7

自Next Generation Sequencing (NGS)技術開發、問世以來,普遍使用者對於其測序的靈敏、準確性要求,在達到了對多數研究應用來說「已經足夠好」的精確水準後,大部分的測序平台開發都集中在測序的成本及測序通量上的優化。PacBio應用其專利的SBB技術 (Sequencing by binding)開發出Onso測序平台,其可提供超高精準度短序列 (short-read),準確率可以達到99.99%以上 (Q40+),優於傳統短序列測序平台的精準度99.9% (Q30)。

       SBB (Sequencing by binding)結合測序技術在測序準確性方面取得新的突破。與傳統短讀長測序儀使用的Sequencing by synthesis (SBS)合成測序技術不同,SBB測序在測序Cycles的每個階段都使用優化的條件,幾乎完全消除了原始讀取錯誤。其作用原理如下:

1.         SBB測序技術由DNA鏈上的聚合酶啟動進行,若鹼基3'端帶有可逆阻斷因子(blocker),則會中止聚合酶反應,待去除可逆阻斷因子後再繼續啟動。

2.         在檢測過程中,Flow Cell中存在著螢光標記 (lable)的鹼基。與傳統的SBS測序不同,這些標記的鹼基不包含阻斷因子 (blocker)。當適合的標記鹼基與DNA鏈結合,就會發出螢光信號,並使用強大的光學儀器進行測量。

3.         與SBS測序的一個關鍵區別是,這種標記的核苷酸鹼基沒有加入DNA鏈中,而是在測序儀器捕獲 (capture)鹼基信號後被洗掉。之後再去除可逆阻斷因子 (blocker),啟動核苷酸的3'端,並加入新的帶有可逆阻斷因子 (blocker)的鹼基。

4.         這確保了未標記、封閉存在於Flow Cell的核苷酸中混入適當的鹼基,從而阻止了未必要的混入,直到下一個循環的時間。

 

       SBB測序技術使用未經修飾、原生型態的核苷酸進行延伸,不需切除螢光也不會殘留分子機制,使定序結果訊號得以有效提升。

 

#Onso PacBio

#Sequencing by binding (SBB)

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