我們先前分享了關於潔淨室 (無塵室)環境空氣監測的「落菌控管」及「空氣採樣法」。而在實務上，若想要完整控管環境微生物污染的風險，除了運用空氣監測方法，應再搭配「培養皿接觸法」和「表面擦拭取樣法」監測不同區域或位置表面污染的可能性、確認整體環境清潔方法的效果。綜觀各產業的監控標準，以製藥業之無菌藥品製造的規定最為嚴格且明確。

        本文以歐盟的EU GMP Annex 1：Manufacture of Sterile Medicinal Products (同衛生福利部食品藥物管理署 (TFDA)法規：西藥藥品優良製造規範 (第一部、附則))，介紹無菌藥品製造環境的分級及其微生物監測標準的限量/限值。

        無菌藥品 (產品)製造的潔淨室區分為A/B/C/D級，共四個等級：

A級：高風險作業的關鍵區域。此區因產品暴露易受污染，並且不會直接在容器中進行消毒，為了保持產品無菌性而必須進行無菌操作。(A級區的製程環境在靜止時與操作時所要求的等級相當於ISO 14644-1空氣中微粒與其空氣潔淨度分級(ISO Classes of air cleanliness by particle concentration)的ISO 5無塵室環境 (即≧0.5μm/m3，允許的總微粒監測限量為3,520)。對潔淨度的要求越嚴格，可容許的微粒和微生物數量就越少，其ISO等級代表的數字越小)。

B級：支援A級區的背景環境。作為製程的背景區域可能包含對未滅菌成分、製造過程中材料、裝備、容器/密封物等之製備、暫存或轉移。此區亦需要監測微粒，確認無塵效果。(靜止時為ISO 5：微粒限量3,520，操作時為ISO 7：微粒限量352,000)。

C級：非關鍵性區域。適用於較不重要的活動，此區採取的監控方式取決於廠區品質風險管理(Quality Risk Management, QRM)之要求。(靜止時為ISO 7：微粒限量352,000，操作時為ISO 8：微粒限量3,520,000)。

D級：非關鍵性區域。適用於較不重要的活動，為潔淨度要求最低的區域。(靜止時為ISO 8：微粒限量3,520,000，操作時則未定義)。

       不同級區監測的注意事項：

1.    執行風險評估並建立文件化的環境監測計畫，包含採樣位置、監測頻率、監測方法、培養條件 (依微生物類型：細菌或真菌，設定時間、溫度、好氧、厭氧等)。

2.    落菌培養皿應在作業期間暴露於A級區及B級區，並在最多4小時之後依需要進行更換 (避免培養基表面乾涸)。而C級區及D級區，其暴露期間(最多4小時，可以少於4小時)及頻率應根據QRM而定。

3.    接觸培養皿適用於A級區及B級區內的設備、房間及工作服表面。而C級區及D級區通常不需要例行的工作服監測 (取決於區域功能的設定)。

4.    特別注意，對於限量規範為無生長的A級區，任何長菌的情形都要調查。

5.    在A級區及B級區偵測到的微生物，應鑑別至「種」的層次，並評估此類微生物對產品品質 (所涉及之每一批次)及整體管制狀態的潛在影響。而C級區及D級區，也應考量鑑別在超出行動限量 (Action Limits)或警戒水準(Alert Levels)所偵測到的微生物、或是在微生物分離後所得到難以管制的類型 (例如：可形成孢子之微生物或黴菌)。應以足夠的監測頻率來了解這些區域當前的典型菌叢，並對微生物鑑別的結果進行趨勢分析，相關紀錄需予以保存。

       針對微生物的鑑別，「源資生物科技核酸實驗室」提供具TAF認證的微生物檢測與分析技術：

1.    「菌種鑑定」：利用細菌16S與真菌ITS之高度保留區域的序列與NCBI資料庫比對，單一菌株的菌盤、菌液均可鑑別至菌種。

2.    「16S metagenome檢測」：此檢測使用次世代定序，為目前最常用來進行環境微生物族群分析的方法；根據微生物體內高度保留的16S rRNA基因序列之變異和豐富度，得到各樣品所含的菌種種類及菌叢分佈比例，探討環境中菌相的變化。

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