聚丙烯醯胺凝膠電泳（Polyacrylamide Gel Electrophoresis, 簡稱 PAGE）是分子生物學與生物化學中最常用的分離技術之一。此技術利用不同大小與電荷的分子在多孔凝膠網狀結構中，於電場作用下移動速率的差異，達到分離與純化蛋白質或核酸的目的。 

一、製膠

所需試劑：

1.30% Acrylamide/Bis-acrylamide (29:1)

2.1.5M Tris-HCl buffer (pH 8.8 分離膠用）

    0.5M Tris-HCl buffer (pH 6.8 濃縮膠用）

3.10% SDS（十二烷基硫酸鈉Sodium dodecyl sulfate）

4.10% APS（過硫酸銨Ammonium persulfate）

5.TEMED

步驟：

1.  玻璃板以乙醇徹底清潔後，組裝於灌膠架中，確保接合處無漏膠。

2.  配置分離膠（Resolving gel，通常 8–12%），混合完成後立即灌入玻璃板間，並在膠面覆蓋異丙醇以確保表面平整。於室溫下靜置聚合 30 分鐘。

3.  聚合完成後，移除異丙醇覆蓋層，配製濃縮膠（Stacking gel，通常 4–5%），將濃縮膠灌於分離膠上方，插入梳子以形成加樣孔，於室溫下靜置約 20 分鐘待其完全聚合。

4.  聚合完成後，小心拔出梳子，用 running buffer 沖洗加樣孔。

小提醒： APS 與 TEMED 要最後加入，加完後動作要快，避免膠在灌入前提前聚合。

Running buffer可以是Tris-Glycine-SDS或是TBE等等。

二、跑膠

1.將膠片組裝入電泳槽，加入 Running buffer。

2.將樣品與 Protein marker 依序加入各加樣孔。

3.接上電源：

  濃縮膠階段：80V，直到樣品進入分離膠。

  分離膠階段：120–150V，跑至 bromophenol blue 前沿接近底部為止。

4.關閉電源，取出膠片。

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