恆溫式圈環形核酸增幅法 (Loop-mediated Isothermal Amplification, LAMP)，是一種能在單一穩定溫度下快速複製DNA的基因增幅技術。它的三大核心特色為：60–65°C恆溫反應、使用具鏈置換活性的Bst DNA聚合酶、以及辨識標的基因多個區域的專屬引子。相較於傳統PCR，LAMP不需昂貴的溫度控制反應儀，能在30到60分鐘內製造出大量的DNA。

📌 反應的三大要素

• 恆溫條件：溫度維持在 60°C 至 65°C 之間，不需要加熱到高溫來打開雙股DNA。

• 關鍵酵素：需使用 Bst DNA polymerase，它具備強大的鏈置換 (strand displacement)活性，能一邊合成新DNA、一邊推開舊的DNA股。

• 專屬引子：針對目標基因的 6 個獨立區域設計 4 到 6 條引子 (包含內引子 FIP/BIP、外引子 F3/B3 及選配的環引子 LF/LB)，因此專一性極高。

📌 運作原理與步驟

• 構造啟動：內引子 (FIP/BIP)先結合到目標DNA，接著外引子 (F3/B3)進行股置換延伸，釋放出帶有特殊莖環 (stem-loop)結構的單股DNA。

• 環狀循環：這個莖環結構自身可以當作模板繼續延伸，而新的引子也能快速結合到環狀區域，展開連續的滾環式 (rolling-circle)增幅。

• 指數擴增：整個反應不斷重複「引子結合、鏈置換、自我延伸」的過程，在短時間內製造出大量不同長度的單股與雙股環狀DNA。

📌 優點與結果判讀

• 快速簡便：不需複雜的PCR溫度控制反應儀，肉眼或簡單儀器即可觀察結果。

• 副產物檢測：LAMP成功擴增DNA則會釋放出焦磷酸根 (Pyrophosphate)，會和反應中的溶液鎂離子 (Mg2+)產生不溶於水的焦磷酸鎂 (Magnesium Pyrophosphate)白色沈澱物。只要看試管內有沒有變混濁，或是加入螢光染劑觀察顏色變化，就能直接判斷結果是否為陽性。

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