【實驗技術系列-Co-Immunoprecipitation原理與應用】

發佈於 2023-9-1

免疫共沉澱(Co-immunoprecipitation,Co-IP)是免疫沉澱(Immunoprecipitation,IP)的延伸方法,主要是研究蛋白質與蛋白質之間是否會有交互作用(Protein-protein interaction)。

免疫共沉澱原理是在非變性條件下裂解細胞,蛋白質與蛋白質之間的交互作用便會被保留下來,之後基於抗原與抗體之間的專一性結合,透過洗滌來去除非專一性結合雜質,進而將目標蛋白純化出來,之後透過實驗來檢測兩者蛋白質之間是否有交互作用。若A蛋白與B蛋白有交互作用的情形,抓到A蛋白同時透過實驗方法也可以檢測到B蛋白。

Co-IP的應用相當廣泛,可經由聚丙烯醯胺凝膠電泳(SDS-PAGE)分離蛋白,並使用西方墨點法(Western Blotting)來測試兩者蛋白之間是否有交互作用;也可透過雙向凝膠電泳(Two-dimensional gel electrophoresis,2D Gel)或液相層析串聯質譜儀( LC-MS/MS;MALDI-TOF MS)等來尋找感興趣的蛋白。但Co-IP依然有其缺點,例如:兩個蛋白之間可能不是直接結合,有可能透過其他蛋白當作橋梁間接被抓下來;或是兩者之間有交互作用,但其過於微弱或是短暫存在,難以被檢測到等等。

這些交互作用的功能都不盡相同,例如:信號分子可以透過蛋白交互作用來完成訊號傳遞、透過交互作用來將蛋白轉運至細胞其他區域以及基因網絡的調控等等,在生物體內都是相當重要的機制,是熱門研究領域之一。

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